人的白介素15 elisa試劑盒(human IL-15 ELISA KIT),是一種利用抗體夾心法測定標本中IGG水平的科研試劑盒。南京信帆生物技術有限公司專業生物試劑人的IL-15 Elisa檢測試劑盒，質量可靠，價格低廉。我們所生物試劑人IGG(免疫球蛋白G)elisa試劑盒，具有度高于市場同類產品，性價比在市場上具有很強的優勢，如果有質量問題或者測試結果有問題，免費包退換。歡迎廣大師生朋友訂購，，號。

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抗人白細胞介素15單克隆抗體的制備、鑒定和初步應用

白細胞介素15（IL-15）是與白細胞介素2（IL-2）有相似生物學活性，但無序列同源性的新細胞因子，其體內分布遠較IL-2廣泛，在免疫調節和免疫應答尤其是在抗腫瘤免疫應答中有重要作用。

對IL-15的鑒定和研究均需有抗IL-15的抗體。本研究的目的是用細胞工程的方法制備鼠抗人IL-15單克隆抗體（簡稱單抗），鑒定其生物學和免疫學特性及理化特性，并初步探討其應用。

方法：自重組人白細胞介素15（rhIL-15）基因工程菌提取融合蛋白GST-IL-15，12%SDS-PAGE電泳鑒定，依據牛血清白蛋白（BSA）的濃度目測選擇蛋白量為50μg的凝膠條帶切下制備免疫原，免疫BALB/c小鼠5次，*次與第二次免疫間隔4周，其后每次免疫間隔2周，融合前三天以rhIL-15包涵體蛋白（rhIL-15IBP）攻擊。取免疫脾細胞與骨髓瘤細胞株Sp2/0，用50%聚乙二醇（PEG）融合，HAT培養基選擇培養出融合細胞。用rhIL-15IBP為抗原，間接ELISA法，初篩分泌抗rhIL-15IBP抗體的融合細胞，有限稀釋法克隆化培養獲得穩定分泌抗rhIL-15IBP單抗的陽性雜交瘤細胞株，zui后以市售有生物學活性的rhIL-15蛋白為抗原，間接ELISA法，鑒定陽性細胞株分泌的單WP=4抗對功能性rhIL-15蛋白的有效性。以體外連續傳30代、反復凍存復蘇5次、液氮中凍存3個月后復蘇，測定細胞株分泌單抗的穩定性。做雜交瘤細胞的染色體計數并與骨髓瘤細胞系Sp2/0和小鼠骨髓細胞的染色體計數進行比較。制備腹水型、上清型和無血清型單抗。用無血清型單抗作間接ELISA測定單抗的Ig類別。用腹水型單抗做耐熱性、耐凍融性實驗及 pH值對單抗穩定性影響實驗。耐熱性實驗分為56℃30分鐘，37℃保存1-7天和4℃保存7天。耐凍融性實驗是腹水型單抗于-20℃凍存后室溫自然融化，反復6次后測定效價。測定 pH值對單抗穩定性影響實驗，是分別以0.05M pH2.2甘氨酸-鹽酸緩沖液, 0.05M pH9.6碳酸鹽緩沖液和 0.01M pH7.4磷酸鹽緩沖液將腹水型單抗（以正鼠血清作陰性對照）作1：10稀釋, 4℃靜置24小時、48小時后間接ELISA測定其OD450與陰性對照OD450的比值。競爭ELISA測定單抗與功能性rhIL-15蛋白反應的特異性及與rhIL-2、IL-6的交叉反應性。以rhIL-15IBP免疫新西蘭白兔制備抗人IL-15的血清型多克隆抗體（多抗）。以PEG沉淀法純化腹水型單抗，以飽和硫酸銨沉淀法純化血清型多抗中的IgG類抗體。用純化的抗人IL-15的單抗與多抗，建立雙抗體夾心間接ELISA，初步應用于檢測系列稀釋的功能性rhIL-15蛋白，確定檢測的敏感性。

結果：自rhIL-15基因工程菌提取GST-IL-15融合蛋白，12%SDS-PAGE鑒定后，切取相應位置的凝膠條帶為免疫原成功免疫小鼠。經細胞融合，HAT選擇培養，抗體檢測篩選，獲得3孔產抗rhIL-15IBP抗體的融合細WP=5胞，經克隆化培養得到一株穩定分泌單抗的雜交瘤細胞株，命名為5B11，其分泌的單抗可與市售的有生物學活性的rhIL-15蛋白結合。5B11雜交瘤細胞株穩定性較好，體外連續傳30代、反復凍存復蘇5次、液氮中凍存3個月后復蘇測定細胞株仍可穩定分泌單抗。5B11雜交瘤細胞染色體計數為90±4條，而小鼠骨髓細胞為40條，Sp2/0骨髓瘤細胞為64±3條。 5B11分泌的單抗的Ig類別為IgM。腹水型單抗的效價為1：12800，上清型單抗的效價為1：64。腹水型單抗作耐熱性和耐凍融性實驗結果為56℃30分鐘效價下降至1：1600；37℃放置1天效價下降一個稀釋度，37℃放置3天又下降一個稀釋度，一直到7天效價穩定在1：3200。反復凍融六次效價不變。pH值對單抗穩定性影響的實驗結果示，酸性和堿性都可使單抗穩定性下降。單抗與功能性rhIL-15特異性結合，與rhIL-2、IL-6沒有交叉反應。獲得的抗人IL-15的血清型多抗，效價為1：40萬，經50%、33%飽和硫酸銨沉淀后效價為1：10萬。以純化的抗人IL-15的單抗與多抗，建立雙抗體夾心間接ELISA，檢測功能性rhIL-15蛋白的敏感性達到10ng/ml。 結論：1自rhIL-15基因工程菌提取的融合蛋白GST-IL-15可以代替功能性rhIL-15作為免疫原制備抗人IL-15單抗；2獲得了一株穩定分泌抗人IL-15單抗的雜交瘤細胞株5B11，染色體計數90±4條，其分泌的單抗Ig類別為IgM；3用純化的抗人IL-15單抗和多抗，建立了雙抗體夾心間接ELISA的方法, 檢測功能性rhIL-15蛋白的敏感性為10ng/ml。